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VectorBuilder試驗(yàn)問(wèn)答
發(fā)布時(shí)間： 2024-03-25 點(diǎn)擊次數(shù)： 1179次北京華新康信年度推廣活動(dòng) VECTORBUILDER 上海試劑 VECTORBUILDER 湖北試劑 VECTORBUILDER 10280血漿對(duì)照 VECTORBUILDER 10280血漿對(duì)照
VECTORBUILDER 活動(dòng)價(jià)VECTORBUILDER 活動(dòng)價(jià)VECTORBUILDER 活動(dòng)價(jià) VECTORBUILDER 所有系列一站式采購(gòu) VECTORBUILDER 檢測(cè)試劑盒 VECTORBUILDER 檢測(cè)試劑盒 VECTORBUILDER 放線(xiàn)菌類(lèi) VECTORBUILDER 放線(xiàn)菌類(lèi)胰蛋白 VECTORBUILDER 江蘇試劑 VECTORBUILDER 湖南試劑 VECTORBUILDER 所有系列一站式采購(gòu)VECTORBUILDER 天津試劑 VECTORBUILDER 所有系列一站式采購(gòu) VECTORBUILDER 天津試劑 VECTORBUILDER 天津試劑 VECTORBUILDER 上海試劑 VECTORBUILDER 上海試劑 VECTORBUILDER 廣東試劑 VECTORBUILDER 廣東試劑 Vectorbuilder代浙江試劑 Vectorbuilder代浙江試劑 Vectorbuilder代安徽試劑 Vectorbuilder代安徽試劑 vectorbuilder代北京試劑 vectorbuilder代北京試劑
我應(yīng)該使用哪種藥物選擇標(biāo)記？
VectorBuilder在其載體上提供了多種藥物選擇標(biāo)記，如嘌呤霉素（Puro）、新素（Neo）、潮霉素B（Hygro）和blasticin（Bsd）?？偟膩?lái)說(shuō)，我們發(fā)現(xiàn)嘌呤霉素比其他抗生素更快、更穩(wěn)定地殺死非耐藥細(xì)胞。因此，我們建議大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型使用Puro。然而，一些細(xì)胞類(lèi)型可能在沒(méi)有耐藥性基因的情況下自然對(duì)某些抗生素具有一定程度的耐藥性，或者即使有耐藥性基因，它們也對(duì)某些抗生素敏感。這些細(xì)胞需要測(cè)試不同的藥物選擇標(biāo)記物，以找到最佳的標(biāo)記物。
常用藥物的推薦濃度和選擇時(shí)間
抗生素細(xì)胞系推薦濃度推薦持續(xù)時(shí)間
嘌呤霉素293T 1-2微克/毫升3-5天
Geneticin（G418）HT1080 500-1000 ug/ml 7-11天
Blasticidin 293T 5-15 ug/ml 7-11天
潮霉素B 293T 100-200微克/毫升5-7天
我們的VectorAcademy文章《增強(qiáng)培養(yǎng)：如何改善細(xì)菌生長(zhǎng)》為優(yōu)化抗生素濃度以及其他培養(yǎng)條件以提高質(zhì)粒產(chǎn)量提供了指南。
筆記
a.使用Geneticin（G418）來(lái)選擇表達(dá)新素抗性基因的細(xì)胞。
b.頻繁地使細(xì)胞傳代可以加速殺細(xì)胞素的選擇。
閱讀更多關(guān)于我們的藥物選擇標(biāo)記物集合的信息
流行的ORF
VectorBuilder提供了許多流行的矢量組件，用戶(hù)在設(shè)計(jì)矢量時(shí)可以從中進(jìn)行選擇。下表提供了有關(guān)這些流行組件的詳細(xì)信息，這些組件按類(lèi)別單獨(dú)列出。
名稱(chēng)描述應(yīng)用程序說(shuō)明參考序列
大腸桿菌β-半乳糖苷酶的ORF_Stuffer氨基酸2-83可用作陰性ORF對(duì)照。由VectorBuilder設(shè)計(jì)
熒光記者
名稱(chēng)描述應(yīng)用說(shuō)明顏色結(jié)構(gòu)最大激發(fā)（nm）最大發(fā)射（nm）亮度（EGFP的%）參考序列
EGFP增強(qiáng)型綠色熒光蛋白；基于野生型GFP變體優(yōu)化的密碼子，該變體來(lái)自水母維多利亞綠錐蟲(chóng)常用的綠色熒光蛋白；在所有熒光蛋白中亮度、光穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性都很高。綠色單體（可形成弱二聚體）484 507 100核酸研究24:4592（1996）
NLS-EGFP-EGFP具有核定位信號(hào)的兩端核定位。綠色單體（可能形成弱二聚體）484 507 100由VectorBuilder設(shè)計(jì)
sfGFP來(lái)自維多利亞綠錐蟲(chóng)的超級(jí)折疊綠色熒光蛋白；GFP變體S30R、Y39N、N105T、Y145F、I171V和A20
我什么時(shí)候應(yīng)該使用熒光蛋白、螢光素酶或LacZ？
熒光蛋白、熒光素酶和LacZ都是基于重組蛋白的報(bào)告子，可用于定位或成像研究。然而，這些系統(tǒng)在幾個(gè)重要方面有所不同，這決定了它們適用于不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
熒光蛋白和螢光素酶都是發(fā)光的蛋白質(zhì)類(lèi)型，然后可以用相機(jī)或類(lèi)似設(shè)備檢測(cè)到。熒光蛋白的功能是吸收一種顏色的光（激發(fā)），然后發(fā)射不同顏色的低能量光（發(fā)射）。相反，螢光素酶（和其他生物發(fā)光酶）通過(guò)催化底物（即螢光素）被氧化的化學(xué)反應(yīng)來(lái)產(chǎn)生光，并作為反應(yīng)產(chǎn)物發(fā)射光子。
熒光蛋白比螢光素酶亮得多，螢光素酶有利于許多類(lèi)型的實(shí)驗(yàn)，但在組織樣本或活體動(dòng)物中，背景、自發(fā)熒光和光散射
我應(yīng)該使用哪種熒光蛋白？
多年來(lái)已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多熒光蛋白，在實(shí)驗(yàn)中使用哪種熒光蛋白取決于許多因素。
單色實(shí)驗(yàn)
對(duì)于單色實(shí)驗(yàn)，綠色FPs是最常見(jiàn)的選擇。EGFP是受歡迎的綠色FP，是許多單色研究的好選擇。然而，其他綠色FP，如TurboGFP（又名maxGFP），可能是某些應(yīng)用的更好選擇。例如，與EGFP相比，TurboGFP具有許多更先進(jìn)的功能，如更亮的綠色熒光、更快的成熟、高pH和光穩(wěn)定性，使其成為受益于早期信號(hào)檢測(cè)和高靈敏度的實(shí)驗(yàn)的理想選擇。如果首紅色FP，mCherry由于其單體結(jié)構(gòu)、良好的熒光性能和低毒性，是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的佳選擇。它特別適用于蛋白質(zhì)標(biāo)記或當(dāng)細(xì)胞對(duì)可能發(fā)生的毒性或蛋白質(zhì)聚集敏感時(shí)
多色實(shí)驗(yàn)
對(duì)于同時(shí)使用多個(gè)熒光團(tuán)（包括FP和DAPI等其他染料）的多色實(shí)驗(yàn)，研究人員必須仔細(xì)考慮熒光團(tuán)的光譜特性，以確保基于可用顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光檢測(cè)中使用的其他硬件上的激發(fā)和/或發(fā)射濾光片，熒光團(tuán)在光譜上是可區(qū)分的?；旧希瑱z測(cè)硬件應(yīng)該能夠在不受其他熒光團(tuán)干擾的情況下從實(shí)驗(yàn)中使用的多個(gè)熒光團(tuán)中的每一個(gè)讀出熒光信號(hào)。這可以通過(guò)使用激發(fā)濾波器（或激光器）來(lái)產(chǎn)生僅激發(fā)感興趣的熒光團(tuán)的適當(dāng)頻率的激發(fā)光來(lái)實(shí)現(xiàn)。也可以通過(guò)使用發(fā)射濾波器僅允許來(lái)自感興趣的熒光團(tuán)的發(fā)射熒光進(jìn)入檢測(cè)器來(lái)實(shí)現(xiàn)。對(duì)于兩種顏色，標(biāo)準(zhǔn)的綠色FP（如EGFP）加上標(biāo)準(zhǔn)的紅色FP（如mCherr）
熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）
FPs廣泛應(yīng)用于許多基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的應(yīng)用中。FRET是一個(gè)物理過(guò)程，在此過(guò)程中，激發(fā)的供體發(fā)色團(tuán)分子通過(guò)非放射性偶極-偶極耦合將能量轉(zhuǎn)移到受體發(fā)色團(tuán)。在觀(guān)察中，FRET導(dǎo)致供體熒光的減少和受體發(fā)射的增加。FRET有幾個(gè)先決條件：供體和受體必須非常接近（10-100?）；受體的激發(fā)光譜必須與供體的發(fā)射光譜重疊；供體和受體的躍遷偶極取向必須平行。FRET依賴(lài)于距離，并且FRET的效率與供體和受體之間的距離的六次方成反比。因此，它對(duì)距離的微小變化非常敏感，使其成為許多應(yīng)用中的強(qiáng)大工具，例如研究DNA或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，并進(jìn)行投資
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